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便攜微生物檢測儀微生物培養(yǎng)的方法

時(shí)間:2019-10-28   來源:青島海晶環(huán)保  作者:石頭石頭
不同種類微生物的培養(yǎng)需要使用不同的培養(yǎng)基。同時(shí)一種微生物也可以通過多種的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。這樣主要介紹使用微生物檢測儀的各種不同培養(yǎng)方法。
1.濾膜法
濾膜是一種微孔性薄膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜(孔徑0.45μm)的抽濾裝置中,經(jīng)過抽濾,細(xì)菌會被截留在膜上,然后將濾膜貼于相應(yīng)細(xì)菌的培養(yǎng)基上,進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)過培養(yǎng)后,濾膜上會根據(jù)不同的培養(yǎng)基,出現(xiàn)各種不同的菌落。計(jì)算濾膜上生長的菌落數(shù),可計(jì)算出每1L水中含有的各種細(xì)菌的菌群數(shù)。濾膜法具有高度的再現(xiàn)性,可用于檢驗(yàn)各種水樣,能比多管發(fā)酵法更快的獲得肯定的結(jié)果。
1.1濾裝置
抽濾裝置包括電池、真空泵、斗式過 濾杯、中間砂心過濾頭(燒結(jié)濾頭)、三角集液瓶以及不銹鋼制固定夾。以無菌操作,依照右圖把裝置安裝起來。
1.2水樣過濾
用無菌鑷子(火焰滅菌器滅菌)夾取滅菌濾膜邊緣,貼在已滅菌的燒結(jié)濾頭(火焰滅菌器滅菌)上,夾好抽過濾杯。將適量的水樣注入過濾杯中,加蓋,開支真空泵,把水中的所有細(xì)菌抽濾在濾膜的表面。
1.3細(xì)菌培養(yǎng)
將濾膜移到培養(yǎng)皿里已被相應(yīng)培養(yǎng)基浸潤的吸收墊上,在移動培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。
1.4結(jié)果觀察與報(bào)告
計(jì)算濾膜上生長的菌群菌落個(gè)數(shù),根據(jù)過濾水樣的量,計(jì)算1L或100ml水樣中菌群數(shù)。
2.酶底物法
酶底物法為GB5750-2006收錄的用于大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測標(biāo)準(zhǔn)方法,酶底物法是目前水中總大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測的最先進(jìn)方法。以其方便快捷,假陽性低,適用大量樣品快速檢測等優(yōu)點(diǎn)正逐步被國內(nèi)檢測部門所認(rèn)可。相對于多管發(fā)酵和濾膜法,酶底物法檢測步驟大大減少,而且對實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求不高,檢測時(shí)間可減少到24小時(shí),在日常水樣監(jiān)測及應(yīng)急監(jiān)測中具有很好的應(yīng)用前景,可及時(shí)檢測,預(yù)防,最大限度的減少重大公共安全事故的發(fā)生幾率。
2.1操作步驟:
用 100 mL的無菌稀釋瓶量取 100 mL 水樣,加入一管酶底物法培養(yǎng)基粉末,混搖均勻使之完全溶解。準(zhǔn)備 10 支10ml適當(dāng)大小的滅菌試管,用無菌吸管分別從上述稀釋瓶中吸取10mL水樣至各試管中,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。
2.2結(jié)果觀察與報(bào)告:
大腸菌群:將培養(yǎng) 24 h之后的試管取出觀察,如果試管內(nèi)水樣變成黃色則表示該試管含有總大腸菌群。計(jì)算有黃色反應(yīng)的試管數(shù),對照下表1查出其代表的總大腸菌群最可能數(shù)CMPN)。 結(jié)果以MPN/100 mL 表示。 如所有管未產(chǎn)生黃色,則可報(bào)告為總大腸菌群未檢出。
表1   不同陽性結(jié)果的最可能數(shù)(MPN)及 95%可信范圍
陽性試管數(shù) 總大腸菌群(MPN/100ml) 95%可信范圍
下限 上限
0 <1.1 0 3.0
1 1.1 0.03 5.9
2 2.2 0.26 8.1
3 3.6 0.69 10.6
4 5.1 1.3 13.4
5 6.9 2.1 16.8
6 9.2 3.1 21.1
7 12 4.3 27.1
8 16.1 5.9 26.8
9 23 8.1 59.5
10 >23.0 13.5  
大腸埃希氏菌:將培養(yǎng)24h顏色變成黃色的水樣的試管,在暗處用紫外燈觀察,如果有藍(lán)色熒光產(chǎn)生則表示有大腸埃希氏菌。計(jì)算有熒光反應(yīng)的試管數(shù),對照表1 查出其代表的大腸埃希氏菌最可能數(shù)MPN), 結(jié)果以MPN/100 mL 表示。 如所有管未產(chǎn)生藍(lán)色熒光,則可報(bào)告為大腸埃希氏菌未檢出。

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